Цель исследования: изучение влияния сочетанного применения препарата бактериофагов и низкоинтенсивного излучения инфракрасного лазера (НИЛИ) на эффективность санации эндометрия, его морфологическую и иммуногистохимическую (ИГХ) картину у пациенток с хроническим эндометритом (ХЭ).
Материалы и методы. Обследованы 555 и пролечены 186 пациенток с хроническим эндометритом; 100 женщинам основной группы проводили процедуры бактериофаголазеротерапии (БФЛТ) по предложенной оригинальной методике, а в контрольной группе 86 больных получали общепринятую противовоспалительную терапию. До начала лечения и спустя 2—3 месяца после него проводили исследование микрофлоры полового тракта, а также морфологическое исследование и ИГХ-исследование пайпель-биоптата эндометрия.
Результаты: Было установлено, что под влиянием сочетанной БФЛТ у пациенток основной группы отмечается выраженный санирующий эффект относительно потенциально значимых этиологических факторов хронического воспаления в полости матки, что отражается на позитивной морфологической и ИГХ-картине эндометрия. У пациенток с традиционным лечением столь же отчетливой положительной динамики добиться не удалось.
Заключение. Сочетание бактериофаготерапии и процедур НИЛИ по предложенной методике является этиопатогенетически обоснованным и эффективным способом лечения хронического неспецифического воспаления эндометрия.
Ключевые слова: бактеориофаготерапия, инфракрасный лазер, контаминированный эндометрий, морфологическое и иммуногистохимическое исследование эндометрия, хронический эндометрит
Мотовилова Т.М., Качалина Т.С., Боровкова Л.В., Гречканев Г.О., Зиновьев А.Н., Гагаева Ю.А., Баныкина Е.В., Аникеева О.В. Изменение микробиологической, морфологической и иммуногистохимической картины эндометрия под влиянием сочетанной бактериофаго-лазеротерапии хронического неспецифического воспаления слизистой полости матки// Женское здоровье и репродукция: сетевое издание. 2020. № 3 (46). URL: http://whfordoctors.su/statyi/izmenenie-mikrobiologicheskoj-morfologicheskoj-i-immunogistohimicheskoj-kartiny-jendometrija-pod-vlijaniem-sochetannoj-bakteriofago-lazeroterapii-hronicheskogo-nespecificheskogo-vospalenija-slizistoj/(дата обращения: дд.мм.гггг)
Мотовилова Татьяна Михайловна — к. м. н., доцент кафедры акушерства и гинекологии ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России. 603005, Россия, г. Нижний Новгород, пл. Минина и Пожарского, 10/1. https://orcid.org/0000-0002-3795-2852. E-mail: tmshka@mail.ru
Качалина Татьяна Симоновна — д. м. н., профессор кафедры акушерства и гинекологии ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России. 603005, Россия, г. Нижний Новгород, пл. Минина и Пожарского, 10/1. https://orcid.org/0000-0002-3459-5335. E-mail: yander24@bk.ru
Боровкова Людмила Васильевна — д. м. н., профессор, зав. кафедрой акушерства и гинекологии ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России. 603005, Россия, г. Нижний Новгород, пл. Минина и Пожарского, 10/1. https://orcid.org/0000-0002-7643-3019. E-mail: borovkovalv@yandex.ru
Гречканев Геннадий Олегович — д. м. н., профессор кафедры акушерства и гинекологии ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России. 603005, Россия, г. Нижний Новгород, пл. Минина и Пожарского, 10/1. https://orcid.org/0000-0003-0021-030X. E-mail: ggrechkanev@mail.ru
Зиновьев Александр Николаевич — к. м. н., доцент кафедры акушерства и гинекологии ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России. 603005, Россия, г. Нижний Новгород, пл. Минина и Пожарского, 10/1. https://orcid.org/0000-0002-1104-5912. E-mail: anzinoviev@gmail.com
Гагаева Юлия Андреевна — клинический ординатор кафедры акушерства и гинекологии ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России. 603005, Россия, г. Нижний Новгород, пл. Минина и Пожарского, 10/1. https://orcid.org/0000-0003-0866-8972. E-mail: ya.gagaeva-julia@yandex.ru
Баныкина Екатерина Владимировна — студентка VI курса лечебного факультета ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России. 603005, Россия, г. Нижний Новгород, пл. Минина и Пожарского, 10/1. https://orcid.org/0000-0003-4279-4913.
Аникеева Ольга Валерьевна — студентка IV курса лечебного факультета ПИМУ. 603005, Россия, г. Нижний Новгород, пл. Минина и Пожарского, 10/1. https://orcid.org/0000-0003-4390-3536
CHANGES IN THE MICROBIOLOGICAL, MORPHOLOGICAL AND IMMUNOHISTOCHEMICAL PATTERN OF THE ENDOMETRIUM CAUSED BY COMBINED BACTERIOPHAGE LASER THERAPY OF NON-SPECIFIC CHRONIC ENDOMETRITIS
M. Motovilova, T. S. Kachalina, L. V. Borovkova, G. O. Grechkanev, A. N. Zinoviev, Yu. A. Gagaeva, E. V. Banykina, O. V. Anikieva.
Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education Privolzhsky Research Medical University of the Ministry of Health of the Russian Federation, Chair of Obstetrics and Gynaecology; Russia, Nizhny Novgorod
Abstract
Study Objective: To study the combined use of bacteriophages and low-intensity IR laser (LIRL) in the efficacy of endometrium sanitation, the morphological and immunohistochemical (IHC) pattern of the endometrium in patients with chronic endometritis (CE).
Materials and Methods. 555 patients were examined and 186 patients with chronic endometritis underwent treatment; 100 women from the test group had bacteriophage laser therapy (BPLT) under an original method; 86 patients from the control group had conventional antiinflammatory therapy. Before and 2–3 months after the therapy, genital tract microflora was examined, and endometrial pipelle biopsy specimen was subjected to morphological and IHC examinations.
Results: It was found out that in the test group the combined BPLT resulted in marked sanitizing effect in relation to potentially significant causative factors of a chronic endometrial inflammation; and the morphological and IHC pattern of the endometrium is improved. Patients undergoing conventional treatment did not show such positive dynamics.
Conclusion. A combination of bacteriophage therapy with LIRL under the proposed method is an ethiopathogenetically justified and efficient therapy of non-specific chronic inflammation of the endometrium.
Keywords: bacteriophage treatment, infrared laser, contaminated endometrium, morphological and immunohistochemical examinations of the endometrium, chronic endometritis
Мотовилова Т.М., Качалина Т.С., Боровкова Л.В., Гречканев Г.О., Зиновьев А.Н., Гагаева Ю.А., Баныкина Е.В., Аникеева О.В.
ФГБОУ ВО «Приволжский исследовательский медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации; Россия, г. Нижний Новгород
Проблема хронического воспаления эндометрия продолжает оставаться актуальной в связи со значительными структурно-функциональными изменениями в ткани, которые формируются на фоне волнообразно-прогрессирующего течения заболевания. Это влечет расстройства менструальной и детородной функций женщины [1—9]. Самовосстановление слизистой полости матки происходит далеко не всегда даже в случае эрадикации возбудителей воспалительного процесса, и в дальнейшем на первый план выходят нарушения микроциркуляции в субэндометриальной зоне, ишемия, оксидативный стресс и несостоятельность иммунной системы, что, в свою очередь, приводит к асинхронной трансформации, аномальной регенерации и рецепции ткани [2, 5, 10—14]. При этом в случае персистирования в эндометрии этиологически значимой флоры на первом этапе необходимо устранить ее негативное воздействие на тканевые структуры. Персонализированный, этиопатогенетически обоснованный подход к лечению хронического воспаления в полости матки призван нивелировать влияния микробных агентов, способствовать восстановлению кровотока эндометрия, улучшению трофических процессов и репаративной способности тканей. В совокупности это может повысить шансы на восполнение функционального и энергетического потенциала слизистой оболочки полости матки для полноценного гестационного процесса [10, 12, 15—22].
На протяжении нескольких лет на научно-клинических базах кафедры акушерства и гинекологии ПИМУ применяется сочетанный метод лечения хронического неспецифического эндометрита с включением поливалентных препаратов бактериофагов и процедур низкоинтенсивного инфракрасного лазерного излучения (НИЛИ), который обеспечивает адекватное влияние на основные этиопатогенетические звенья патологического процесса с одновременным снижением медикаментозной нагрузки на организм пациентки [23]. Для бактериофаготерапии (БФТ) характерны высокоспецифичное воздействие на патогенную флору в отношении гомологичных микроорганизмов, в том числе устойчивых к антибиотикам, а также способность препаратов к активизации иммунного ответа за счет антигенного влияния. Низкоинтенсивное лазерное излучение, являясь мощным биостимулятором, способствует восстановлению морфофункционального состояния клеточных мембран, оптимизации их энергетического баланса, активации ядерных систем ДНК-РНК белка, усилению образования аденозинтрифосфата (АТФ), снижению концентрации продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ). В итоге уменьшается интерстициальный отёк тканей, нормализуется рецепторная чувствительность, повышается скорость кровотока, происходит образование новых коллатералей, активизируется репаративная регенерация тканей. Весьма актуальным является также вопрос о контроле эффективности терапии эндометрита, что может базироваться на оценке микробиологической и гистологической картины воспаления.
Цель исследования — изучить влияние сочетанного применения препарата бактериофагов и НИЛИ на эффективность санации эндометрия, его морфологическую и иммуногистохимическую картину у пациенток с хроническим эндометритом (ХЭ).
Материалы и методы
На первоначальном этапе нами были обследованы 555 пациенток с ХЭ. Они прошли стандартную общепринятую диагностику в соответствии с современными рекомендациями, включая гистероскопию с биопсией эндометрия, микробиологическое, морфологическое, иммуногистохимическое (ИГХ), ультразвуковое (УЗ ) и допплерометрическое исследования и др.
В процессе гистологического исследования в образце ткани эндометрия, забранного при помощи пайпель-биопсии, оценивали присутствие общепринятых морфологических признаков ХЭ, а именно: наличие лимфоидных инфильтратов, склероза стенок спиральных артерий, а также присутствие плазматических клеток. У части пациенток при неполной морфологической картине ХЭ для повышения эффективности диагностики проводили ИГХ-исследование с определением маркеров ХЭ – CD-138 и CD-56.
Особое внимание уделяли тщательной детекции этиологических факторов заболевания. В частности, всем больным с ХЭ выполняли фемофлор-скрин гомогената эндометрия и его посев на аэробную и анаэробную флоры. При позитивном результате микробиологического теста наряду с традиционным определением чувствительности к антибиотикам определяли также фагочувствительность выявленной флоры. Аналогичное исследование осуществляли относительно нижнего отдела полового тракта.
Контрольное исследование было выполнено у небольшой части пациенток (преимущественно по рекомендации репродуктологов) через 2—3 месяца после окончания лечения.
Все пациентки были разделены на две группы с учетом характера флоры, потенциально чувствительной к литическому действию бактериофагов (стафилококки, кишечные палочки, энтерококки, стрептококки, клебсиеллы, протеи). В I (основную) группу вошли 100 женщин, которые получали процедуры сочетанной бактериофаголазеротерапии (БФЛТ). Целесообразность совместного применения лазера и бактериофага была обоснована нами ранее в процессе доклинического эксперимента с учетом стимулирующего влияния НИЛИ на литическую активность фагов (Мотовилова Т.М, Кочеткова Л Г. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на лизирующие свойства бактериофагов. Вестник Лазерной Академии Наук 2002; 6(67): 3.)
Лечебные мероприятия начинались на 5—7-й день менструального цикла и включали в себя введение в полость матки 4—7 мл препарата жидкого комплексного пиобактериофага с последующим проведением сеанса инфракрасной лазерной терапии (длина волны 0,89 мкм, частота следования импульсов 80-1500 Гц, мощность в импульсе 5 Вт) по предложенной нами методике [23]. Внутриматочные процедуры бактериофаготерапии осуществляли через день №3—5 наряду с пероральным назначением пиобактериофага по 30 мл 2 раза в сутки. Использованный в данной работе препарат комплексный жидкий пиобактериофаг активен против основных возбудителей неспецифического воспаления, в частности, Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca. Процедуры лазеротерапии проводили ежедневно, общая продолжительность курса лечения составляла 10 дней.
Во II (контрольную) группу вошли 86 женщин, которые получали стандартное лечение, включающее в себя антибиотики широкого спектра действия (доксициклин+метронидазол — в стандартных дозах), дезагреганты, витамины и физиотерапию.
Обе группы были сравнимы по возрасту, характеру менструальной функции, сопутствующей патологии и репродуктивному анамнезу. Длительность заболевания не превышала 3 лет.
Критерии включения в исследование: репродуктивный возраст, наличие морфологически подтвержденного ХЭ и расстройств фертильности, неспецифическая этиология воспаления в полости матки, наличие информированного согласия на участие в исследовании.
Критериями исключения из исследования стали: эхографические и гистероскопические признаки гиперпластических процессов эндо- и миометрия, специфическая этиология эндометрита, синехии в полости матки (до гистерорезектоскопии), наличие системных заболеваний, применение антимикробных препаратов в течение последних 3-х месяцев.
Для статистической обработки результатов использовали стандартныеформулы и программы Microsoft Excel, LibreOffice Calc, IBM SPSS Statistics 19.
Проверка выборок на нормальность проводили с применением метода Колмогорова-Смирнова. Для обработки данных, подчиняющихся нормальному закону распределения, использовали среднее арифметическое (М) и стандартное отклонение (SD). Если выборки не соответствовали нормальному закону распределения, то данные представляли в виде медианы Me и интерквартильного интервала в виде медианы (Me) и квартилей Q1 и Q3. Для сравнительного анализа выборок использовалис непараметрические критерии Манна—Уитни и Вилкоксона.
Результаты и обсуждение
В ходе обследования было установлено, что из 555 больных с морфологически подтвержденным диагнозом ХЭ позитивные результаты микробиологического исследования эндометрия были отмечены у 186 (33,5%) женщин, а неспецифическая этиология заболевания продемонстрирована у 152 (81,7%) из них, которые в последующем продолжили участие в исследовании. Было установлено, что флора в полости матки была представлена преимущественно ассоциациями микроорганизмов (93%), среди которых в диагностически значимых титрах ≥10⁴ КОЕ/мл доминировали представители условно-патогенной группы: Staphylococcus spp. (30,6%), Enterococcus (19,4%), Escherichia coli (16,1%), реже встречались различные комбинации Streptococcus spp., Klebsiella spp., Proteus и др.
Мы проанализировали эффективность санирующего влияния поливалентного препарата бактериофагов в сочетании с воздействием ИК-лазера на характер изменения микробиоценоза верхнего и нижнего отделов полового тракта больных с ХЭ (рис.1).
Рис.1. Количественная характеристика микрофлоры влагалища и цервикального канала до и после проведения сочетанной БФЛТ (n=100)
Как видно из представленных на рис.1 данных, в процессе проведенной БФЛТ произошло существенное уменьшение частоты выявления данных микроорганизмов во влагалище и цервикальном канале. Так, отмечено снижение количества стафиллококков в 3,27 раза, кишечной палочки — в 3,14 раз, энтерококкоков — в 5,67 раз, стрептококков — в 2 раза. Клебсиеллы и протеи в повторном посеве после лечения не выявлялись (р < 0,01).
Что касается группы контроля, то проведен анализ частоты выявления этиологических факторов из нижнего этажа полового тракта с учетом доминирующей флоры у пациенток с ХЭ. Результаты анализа представлены на рис. 2.
Рис.2 Количественная характеристика микрофлоры влагалища и цервикального канала обследуемых пациенток до и после проведения традиционной терапии ХЭ (n=86)
Диаграммы свидетельствуют, что детекция стафилококков и энтерококков после общепринятой терапии в группе контроля уменьшилась в 1,6 раз, кишечной палочки — в 1,8 раз, а стрептококков — в 2,5 раза, что существенно уступает по эффективности применения сочетания поливалентных бактериофагов и НИЛИ.
Контрольное микробиологическое исследование эндометрия в динамике проводили лишь у небольшой части пациенток с ХЭ во избежание необоснованных внутриматочных вмешательств и предупреждения ятрогенных осложнений. В результате лечения с применением поливалентных препаратов бактериофагов в сочетании с НИЛИ позитивная динамика относительно санирующего воздействия на эндометрий была выражена в еще большей степени: количество стафиллококков уменьшилось в 13,5 раз, кишечной палочки — в 20 раз, энтерококкоков — в 11 раз, стрептококков — в 5,5 раз (р < 0,001). Клебсиеллы и протеи в контрольном посеве из полости матки после лечения также не выявлялись (рис. 3).
Рис.3. Количественная характеристика микрофлоры эндометрия до и после проведения сочетанной БФЛТ (n=35)
Помимо оценки влияния на микрофлору полового тракта различных методов лечебного воздействия при ХЭ были изучены изменения в морфологической картине ткани. Наиболее часто встречающимся признаком заболевания в образцах эндометрия являлось обнаружение лимфоидных инфильтратов — у 94 (96,9%) больных основной и у 53 (94,6%) пациенток контрольной группы. Несколько реже встречались плазматические клетки — в 76 (77,6%) и 47 (83,9%) случаев соответственно, а также кольцевидный склероз вокруг мелких сосудов — 42 (42,9%) и 22 (39,3%) (табл.1).
Таблица 1. Частота морфологических признаков ХЭ у пациенток основной и контрольной групп
Примечание. р*— критерии статистической значимости различия результатов до и после лечения; рᵡ — критерии статистической значимости различия результатов после лечения между основной и контрольной группами.
Как следует из данных таблицы, наилучший эффект от проведенной терапии у пациенток с ХЭ наблюдался в группе, где применялся метод сочетанной БФЛТ. У них более существенно, в отличие от больных с традиционным лечением, снизилась частота выявления лимфоидных инфильтратов и плазматических клеток в образце ткани эндометрия. Достоверной динамики относительно частоты детекции склероза стенок спиральных артерий после проведенного лечения в обеих группах не наблюдалось, так как данный признак, очевидно, является показателем более глубоких тканевых изменений.
При неполной морфологической картине ХЭ проводили ИГХ- исследование с определением CD-138 и CD-56 (табл. 2).
Таблица 2. Количественный состав лимфоцитов эндометрия у пациенток с ХЭ в группах с БФЛТ и традиционным лечением
Примечание. р*— критерии статистической значимости различия результатов до и после лечения; рᵡ — критерии статистической значимости различия результатов после лечения между основной и контрольной группами
Из табл. 2 следует, что исходные численные значения количества клеток, экспрессирующих маркеры плазматических клеток (CD-138) и натуральных киллеров (CD-56), характеризуют умеренную выраженность хронического воспаления в полости матки. Их количество наиболее отчетливо снижается после сочетанной БФЛТ по сравнению с общепринятым лечением, причем нормальных значений уровни CD-138 в данной группе достигают у 25 (75,8%) больных, а в группе контроля — лишь у 9 (32,1%). Что касается CD-56, то к норме данный параметр после лечения приходит в 4 (22,2%) случаев под влиянием бактериофагов и лазерного излучения и в 2 (15,4%) — у пациенток с традиционным лечением.
Таким образом, полагаем, что у пациенток с хроническим эндометритом, обусловленным персистенцией условно-патогенной флоры, сочетание применения поливалентных препаратов бактериофагов и инфракрасного лазерного излучения способствует нивелированию выраженности воспалительного процесса в полости матки и вторичных повреждений в ткани. Бактерицидный и иммуномодулирующий механизмы поливалентного препарата бактериофагов снижают влияние инфекционных факторов, а инфракрасное низкоинтенсивное лазерное излучение потенцирует литическую активность бактериофагов, как было показано ранее, а также оказывает противовоспалительный эффект и стимулирует процессы регенерации ткани [23]. Это демонстрируется отчетливой положительной динамикой микробиологических, морфологических и иммуногистохимических параметров эндометрия. Очевидно, что сочетанная БФЛТ оказывает более существенное позитивное влияние, чем общепринятая терапия ЭХ.
Заключение
Сочетание бактериофаголазеротерапии (БФЛТ) и процедур низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) по предложенной методике является этиопатогенетически обоснованным и эффективным способом лечения хронического неспецифического эндометрита, учитывая комплексное положительное воздействие двух этих лечебных факторов.
Предыдущая статья
Боровкова Л.В., Колобова С.О., Боровкова Н.Ю., Полякова И.В., Некрасов А.А., Тимощенко Е.С., Анд...
Следующая статья
Гречканев Г.О.1, Котова Т.В.2, Райкова А.С.2, Угланова Н.П.